Papel da expressão do gene PADI4 na formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos e em diferentes genótipos da doença falciforme pediátrica

Introdução

A doença falciforme é uma desordem hematológica causada por mutação no gene da cadeia β da hemoglobina, que leva à formação da hemoglobina S, à falcização dos eritrócitos, à hemólise e à vaso-oclusão. As manifestações começam nos primeiros meses de vida e elevam as taxas de hospitalização e de mortalidade infantil. Os neutrófilos têm papel central na fisiopatologia: quando ativados, liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs), e o desequilíbrio nesse processo promove inflamação sistêmica, trombose e lesão vascular. A enzima PAD4, codificada pelo gene PADI4, realiza a citrulinação de histonas, etapa essencial para a liberação das NETs (NETose). A expressão de PADI4 está aumentada em pacientes durante episódios vaso-oclusivos.

Objetivo

O trabalho buscou compreender o papel da expressão do gene PADI4 na fisiopatologia de crianças com doença falciforme.

Método

Estudo aprovado pelo Comitê de Ética, com 20 crianças de 1 a 13 anos com doença falciforme, em acompanhamento ambulatorial. Foram excluídas perdas de seguimento, crise álgica no momento da coleta e óbitos. Amostras de sangue periférico foram coletadas em tubos com heparina e EDTA. Os neutrófilos do sangue heparinizado foram isolados por gradiente de densidade, estimulados com PMA e incubados por 4 horas. Em seguida, foram marcados com anti-CD66a e Sytox Green, e a NETose foi quantificada por citometria de fluxo. No sangue com EDTA, extraiu-se o RNA total e sintetizou-se o cDNA. A expressão relativa de PADI4 foi determinada por PCR em tempo real, com ACTB como gene de referência, pelo método 2^-ΔCt. A análise estatística foi feita no GraphPad Prism 10.3.1 e os dados foram considerados significativos se p < 0,05.

Resultados e discussão

Dos 20 pacientes, 12 (60%) tinham genótipo HbSS e 8 (40%) HbSC. Onze (55%) eram do sexo masculino e 9 (45%) do feminino, com mediana de idade de 7 anos (mín. 1 – máx. 13 anos). Todos os pacientes usavam ácido fólico e 13 utilizavam hidroxiureia associada: 11 HbSS (aproximadamente 92% das crianças HbSS) e dois HbSC (25% das crianças HbSC). Não houve diferença significativa na expressão de PADI4 entre os genótipos analisados (p=0,17). Também não houve associação linear significativa entre NETose e expressão de PADI4 em HbSS (r=-0,47; p=0,14; R²=0,22) nem em HbSC (r=-0,05; p=0,92; R²=0,02). Embora a anemia falciforme seja considerada mais grave que a variante SC, PADI4 pode exercer papel transversal na inflamação basal da doença, independentemente do genótipo. A ausência de correlação com a NETose sugere que a expressão gênica isolada não explica a magnitude da formação de NETs, processo multifatorial que pode sofrer influência do estado inflamatório, da hemólise e da ativação neutrofílica. Além disso, o uso de hidroxiureia pela maior parte dos pacientes HbSS, contra 25% dos HbSC, pode ter interferido na ativação neutrofílica e contribuído para a semelhança entre os grupos.

Conclusão

Na amostra analisada, não houve diferença na expressão de PADI4 entre os genótipos HbSS e HbSC, nem associação entre a expressão gênica e a NETose. São necessários estudos com casuísticas maiores e estratificação por genótipo e fase clínica para elucidar o papel de PADI4 como biomarcador de gravidade na doença falciforme pediátrica.

Palavras-chave

• Doença falciforme
• PADI4
• NETose
• Neutrófilos
• Pediatria