Avaliação do efeito imunomodulador do probiótico da bactéria Bacillus subtillis (cepa 118) no intestino de camundongos C57BL/6 infectados por Toxoplasma gondii

Introdução

A toxoplasmose é uma doença causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. A principal forma de infecção ocorre pela via oral, por meio da ingestão de água ou alimentos contaminados pelo parasita. Nesse sentido, a barreira intestinal, em conjunto com sua microbiota residente, representa uma importante defesa contra a entrada e multiplicação do parasita no organismo. No entanto, a infecção por T. gondii pode desencadear uma inflamação excessiva no ambiente entérico, promovendo disbiose e comprometendo a capacidade de defesa do hospedeiro contra este patógeno. Dessa forma, os probióticos são microrganismos vivos capazes de restaurar o equilíbrio do microbioma e modular a imunidade de mucosa devolvendo o potencial protetor do intestino contra agentes infecciosos.

Objetivo

Avaliar o efeito imunomodulador do probiótico da bactéria Bacillus subtilis (cepa 118) no intestino de camundongos infectados por T. gondii.

Método

Foram utilizados 40 camundongos machos da linhagem C57BL/6 divididos em quatro grupos experimentais (10 animais/grupo). Os animais tratados com B. subtilis e infectados (T/I) ou não (T/NI) por T. gondii receberam, por gavagem, 100 μL de probiótico diluído em PBS, diariamente. Os animais não tratados e infectados (NT/I) ou não (NT/NI) receberam PBS nas mesmas condições. Os animais foram tratados ou não por 10 dias. No terceiro dia de tratamento, os camundongos dos grupos infectados receberam, por gavagem, 20 cistos da cepa ME 49 de T. gondii. No décimo dia de tratamento e oitavo dia de infecção os animais foram eutanasiados. O intestino delgado foi coletado e fragmentado em duodeno, jejuno proximal, jejuno distal e íleo. Foi retirado de cada segmento um fragmento de 1cm, os quais foram utilizados para a quantificação de citocinas intestinais de perfil Th1, Th2 e Th17, sendo elas: IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-4, IL-6, IL-17 e IL-10 utilizando kit Cytometric Bead Array™ (CBA) para camundongos (BD Bioscicence). Portanto, os fragmentos foram homogeneizados no TyssueLyser em tampão RIPA com inibidor de protease e foram centrifugados com posterior coleta do sobrenadante. As amostras foram encubadas com uma mistura de beads e anticorpos com fluorocromo de detecção. Então, a solução foi transferida para tubos para análise por citometria de fluxo. Os resultados foram considerados em pg/mL, baseando-se em uma curva padrão previamente construída. Os dados foram analisados pelo programa GraphPad Prisma, utilizando os testes one-way ANOVA e Kruskal-Wallis. Para os dados de correlação foram realizados os testes de Pearson e Spearman.

Resultados e discussão

Os achados evidenciam um aumento na produção das citocinas IFN-γ e TNF-α nos grupos infectados (NT/I e T/I) em relação aos não infectados, demonstrando a importância destas citocinas para o controle do parasita. Além disso, o grupo NT/I evidenciou perda de correlação de IFN-γ com as citocinas IL-2, IL-4 e IL-6. No entanto, o grupo T/I restaurou esta correlação, demonstrando uma resposta coordenada entre os perfis Th1, Th2 e Th17 que é essencial para o combate ao parasita, sem ocasionar inflamação e danos epiteliais excessivos.

Conclusão

Conclui-se que o probiótico foi capaz de estimular coordenadamente a resposta imune, o que contribui para minimizar a inflamação excessiva e os danos na barreira intestinal durante a infecção por T. gondii.

Palavras-chave

• Toxoplasma gondii
• Imunomodulação
• Bacillus subtilis
• Probiótico