Avaliação do efeito genotóxico e da atividade citostática no ciclo celular de células tratadas com látex de Euphorbia umbellata

Introdução

Os compostos fitoterápicos são, na atualidade, estratégias terapêuticas complementares para necessidades não contempladas na medicina convencional. Pesquisas sobre o látex de Euphorbia umbellata, usado empiricamente por populações nativas do sul do Brasil e conhecido por seu potencial antitumoral, são relevantes para garantir a segurança de seu uso, sem prejuízo à saúde dos pacientes.

Objetivo

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito genotóxico do látex liofilizado de E. umbellata em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de indivíduos saudáveis in vitro, bem como o potencial citostático do látex em linhagens de neoplasias hematológicas (Jurkat, K-562, Raji) nas fases G1, S e G2 do ciclo celular.

Método

Para avaliar o efeito genotóxico, realizou-se o teste do micronúcleo em cultura de sangue periférico (750 μL) com RPMI, soro fetal bovino (20%) e fitohemaglutinina (1 μg/mL). O látex de Euphorbia umbellata foi diluído em água de injeção (solução-mãe de 0,9 μg/mL) e testado em 200 e 100 μL, com base no volume utilizado popularmente em garrafadas, além de controles positivo (bleomicina) e negativo (meio suplementado sem tratamento). Citocalasina foi adicionada às 44 horas e as lâminas foram preparadas às 72 horas. Para o ciclo celular, PBMCs e as linhagens neoplásicas foram tratadas em triplicata com látex puro ou liofilizado por 18 e 40 horas, marcadas com iodeto de propídio e analisadas por citometria de fluxo (50.000 eventos) no FlowJo™.

Resultados e discussão

Apesar das tentativas, não foi possível contar 2.000 células binucleadas nas lâminas tratadas com látex, mínimo necessário para validar o teste do micronúcleo. O ensaio de ciclo celular e atividade citostática incluiu PBMCs para avaliar se o látex interfere no ciclo de linfócitos saudáveis. Os resultados mostraram diferenças significativas, dependentes do tipo celular e do tempo de exposição. Nas PBMCs, o látex puro aumentou pré-G1 às 18 horas e o liofilizado aumentou S e G2; às 40 horas, ambos reduziram pré-G1 e G1, com aumento de S e G2 (puro) e de G2 (liofilizado). Em Raji, o látex liofilizado aumentou S e reduziu G2 às 18 horas e, às 40 horas, elevou pré-G1 e causou acúmulo expressivo em S e G2. Em Jurkat, houve aumento apenas de G2 às 40 horas com látex puro, e K562 não apresentou diferença significativa. O predomínio de G1 na maioria dos grupos indica viabilidade e proliferação. O aumento de pré-G1 sugere fragmentação de DNA, característica de apoptose, e o acúmulo em S/G2 indica possível dano na replicação do DNA, retendo células danificadas e impedindo sua progressão à mitose.

Conclusão

O tratamento com látex puro e liofilizado pode ser citostático para PBMCs e para linhagem Raji, ao aumentar as frações de S e G2, com possível dano na síntese e replicação do DNA nas fases finais do ciclo celular. O aumento de células em G2 na linhagem Jurkat com adição de látex puro também sugere possível citoestaticidade, porém experimentos adicionais devem ser realizados para a devida confirmação.

Palavras-chave

• Hematologia
• Fitoterapia
• Oncologia
• Genética