Efeito da exposição a doses subinibitórias de biocidas sobre a susceptibilidade de linhagens de Listeria monocytogenes a antibióticos clinicamente relevantes

Introdução

Listeria monocytogenes é uma bactéria Gram-positiva e psicotrófica, amplamente distribuída no ambiente. Trata-se de um patógeno de relevância na indústria de alimentos, pois o consumo de alimentos contaminados com L. monocytogenes pode levar à infecção denominada listeriose. Apesar do uso rotineiro de biocidas, como hipoclorito de sódio, cloreto de benzalcônio e ácido peracético, na higienização de indústrias de alimentos, evidências indicam que exposições repetidas a concentrações subinibitórias comprometem a eficácia da sanitização e favorecem a seleção de linhagens resistentes.

Objetivo

Avaliar se a exposição a doses subinibitórias de biocidas comumente utilizados na indústria de alimentos causa adaptação e influencia a susceptibilidade de linhagens de L. monocytogenes a antibióticos.

Método

Foram avaliadas 10 linhagens de L. monocytogenes isoladas de alimentos e linhas de processamento de alimentos, além da linhagem de referência ATCC 19112. A concentração inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM) dos biocidas hipoclorito de sódio, cloreto de benzalcônio e ácido peracético foram determinadas pelo método de microdiluição (BHI, 37 °C). Para a adaptação, as linhagens foram expostas progressivamente aos biocidas, iniciando em 0,5×CIM e duplicando a concentração a cada etapa com crescimento, até ausência de crescimento em 72 horas. A sensibilidade a antibióticos foi avaliada por disco-difusão, a hidrofobicidade, pela adesão ao xileno e a formação de biofilmes pelo método de cristal violeta. Os resultados obtidos para as linhagens adaptadas aos biocidas foram comparadas àqueles obtidos para as linhagens não adaptadas.

Resultados e discussão

Os valores de CIM e CBM variaram entre as linhagens, indicando efeito linhagem-dependente. Seis linhagens apresentaram maior capacidade de adaptação ao hipoclorito de sódio e ao ácido peracético, crescendo em concentrações de 1,5 a 2xCIM inicial. O cloreto de benzalcônio não foi usado na adaptação, pois a maior concentração disponível (25%) já correspondia à CIM. A adaptação alterou o perfil de suscetibilidade a antibióticos sem tendência uniforme à resistência: aproximadamente 23,0% das linhagens adaptadas aos biocidas apresentaram menor suscetibilidade, enquanto 20,6% das linhagens adaptadas apresentaram maior suscetibilidade aos antimicrobianos avaliados. Em geral, as linhagens adaptadas apresentaram menor hidrofobicidade, sugerindo alterações na superfície celular. A formação de biofilme foi linhagem-dependente: na ausência do biocida, as linhagens adaptadas formaram de 55,92% a 178,24% mais biofilme quando comparadas às linhagens não adaptadas; na presença do biocida, a maioria das linhagens apresentou menor formação de biofilme em relação aos controles não adaptados.

Conclusão

A suscetibilidade das linhagens de L. monocytogenes variou entre os biocidas. A exposição progressiva aumentou a concentração tolerada por algumas linhagens, com respostas dependentes da linhagem e do biocida. As alterações no perfil de sensibilidade a antibióticos dependeram da combinação linhagem–antibiótico e não indicaram aumento global da resistência. Foram observadas ainda diferenças de hidrofobicidade e de formação de biofilme entre linhagens adaptadas e não adaptadas.

Palavras-chave

• patógeno alimentar
• controle microbiano
• desinfecção
• resistência bacteriana
• biofilmes