Análise do efeito imunomodulador de linhagem probiótica de Bacillus velezensis

Introdução

A disbiose intestinal e os processos inflamatórios crônicos têm impulsionado a busca por estratégias capazes de modular a resposta imune. Nesse contexto, probióticos e pós-bióticos apresentam potencial terapêutico por influenciarem a microbiota e mecanismos imunológicos. Bacillus velezensis destaca-se pela resistência a condições adversas e produção de metabólitos antimicrobianos e imunomoduladores. Apesar de evidências de benefícios em modelos experimentais, permanecem lacunas quanto à interação de seus produtos com células da imunidade inata, especialmente macrófagos.

Objetivo

Avaliar o efeito imunomodulador do sobrenadante livre de células (CFS) de uma potencial linhagem probiótica de Bacillus velezensis sobre a produção de citocinas e expressão de receptores de membrana em macrófagos.

Método

A cepa 1273 de B. velezensis foi cultivada em meio RPMI por 24, 48 e 72 horas para obtenção do CFS, posteriormente filtrado. Macrófagos RAW 264.7 foram cultivados em meio RPMI 5%, plaqueados a 5×10⁴ células/ml, e tratados por 24 horas com diferentes concentrações do sobrenadante. A quantificação de TNF-α e IL-10 foi realizada por ELISA. A expressão dos marcadores de membrana CD40, CD86, CD80, CD197, TLR2, TLR4 e TLR6 foi analisada por citometria de fluxo, considerando percentual de células positivas e intensidade média de fluorescência (MFI). Foram adquiridos 5.000 eventos por amostra, e os dados analisados no FlowJo 10.0.6. A análise estatística foi realizada no GraphPad Prism 10.1.1.

Resultados e discussão

O CFS de 24 horas promoveu aumento da produção de TNF-α, principalmente a 2,5% e 5%, enquanto os sobrenadantes de 48 e 72 horas apresentaram menor produção. A IL-10 aumentou em todos os tempos, com maior resposta nas concentrações intermediárias em 24 horas e aumento progressivo nas concentrações mais elevadas em 48 e 72 horas. Esses achados indicam que os produtos bacterianos podem modular tanto respostas inflamatórias quanto regulatórias. Na análise dos receptores, observou-se aumento do percentual de células CD80 após tratamento com sobrenadante a 2,5% obtido em 48 horas, em comparação com os de 24 e 72 horas. Para TLR2, os sobrenadantes a 30% obtidos em 24 e 72 horas apresentaram maior percentual de células positivas e maior MFI em relação a 48 horas. Entretanto, os tratamentos de 48 horas a 30% e de 48 e 72 horas a 50% apresentaram redução no percentual de células em comparação ao controle. Para TLR6, a 50%, o percentual de células foi maior em 24 e 48 horas que em 72 horas, enquanto a MFI foi maior em 72 horas e no controle. Para TLR4, a 50%, a MFI foi maior em 24 horas que em 48 horas. As alterações seletivas observadas nos receptores Toll-like, associadas às diferenças entre os tempos de cultivo, sugerem que a composição dos metabólitos presentes varia ao longo do crescimento bacteriano e pode influenciar a resposta dos macrófagos.

Conclusão

O CFS de B. velezensis 1273 apresenta potencial imunomodulador sobre macrófagos RAW 264.7, promovendo alterações na produção de citocinas e na expressão de receptores relacionados à imunidade inata. Esses efeitos dependem do tempo de cultivo bacteriano e da concentração do CFS, reforçando o papel dos metabólitos bacterianos como moduladores da resposta imune.

Palavras-chave

• Bacillus velezensis
• Imunomodulação
• Macrófagos
• Citocinas
• Receptores Toll-Like