Análise do efeito do tratamento com a Echinacea purpurea sobre a expressão de genes relacionados a imunidade mediada por linfócitos citotóxicos (T CD8+)

Introdução

A Echinacea purpurea, da família Asteraceae, apresenta potencial imunomodulador associado a compostos bioativos que influenciam citocinas, mediadores pró-inflamatórios e a capacidade de modular a expressão de alguns genes. Esta planta também atua sobre atividade de células citotóxicas, como Natural Killer e linfócitos T CD8⁺, que são essenciais no combate de células infectadas e neoplásicas por meio da liberação de perforina e granzima. Apesar do potencial dos fitoterápicos como alternativas complementares e de baixo custo, há escassez de estudos sobre a ação da Echinacea purpurea na imunidade mediada por linfócitos T CD8⁺ e na expressão de genes relacionados a citotoxicidade. Portanto, este estudo busca investigar esses mecanismos e o potencial terapêutico da planta.

Objetivo

Analisar o efeito do tratamento com Echinacea purpurea na expressão de perforina e granzima B associados à imunidade mediada por linfócitos citotóxicos, visando compreender os mecanismos imunomoduladores envolvidos no processo.

Método

Trata-se de um estudo primário, analítico, de caráter biológico e experimental aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa. Foram obtidas células mononucleares do sangue periférico de indivíduos saudáveis, divididas em grupo não tratado e tratados com extrato de Echinacea purpurea por 24 horas em duplicata, nas concentrações 50 e 100 ug/mL. As concentrações foram definidas após a determinação do IC50, que foi de 196.1 ug/mL (R2= 0,9708). A quantificação das proteínas perforina e granzima B em linfócitos TCD8+ e células NK foi feita por meio de citometria de fluxo. A quantificação relativa dos genes PRF1 e GZMB foi determinada por PCR em Tempo Real. As análises estatísticas foram realizadas por meio do software GraphPad Prism 9.1.3.

Resultados e discussão

Quanto à produção de perforina nas subpopulações de células NK e linfócitos T CD8⁺ por citometria de fluxo, observou-se um aumento significativo da expressão nas células CD56⁺ (NK) nas concentrações de 50 e 100 μg/mL (p < 0,0001). Nas células CD8⁺, esse aumento ocorreu apenas na concentração de 50 μg/mL (p < 0,0001), sugerindo que o extrato pode influenciar a atividade citotóxica das células NK. Na análise por qPCR, foi observado que o tratamento com 100 ug/mL aumentou os níveis transcricionais de GZMB em cerca de 10 vezes e em 9 vezes de PRF1 em relação ao grupo não tratado, embora não tenha alcançado significância estatística (p= 0.3982 e p= 0.0696, respectivamente). Em 50 ug/mL observou-se um aumento de 10,66 vezes nos níveis transcricionais de PRF1 e 2,55 vezes dos níveis de GZMB quando comparado ao grupo não tratado, porém sem significância estatística (p= 0.1665 e p=0.9565, respectivamente). Esses dados sugerem que há uma relação de expressão inversa entre perforina e granzima B, provavelmente devido essas proteínas possuírem vias transcricionais e pós transcricionais independentes, apesar de atuarem de forma cooperativa.

Conclusão

Conclui-se que o extrato etanólico de Echinacea purpurea é capaz de influenciar significativamente a modulação das proteínas citolíticas em linfócitos citotóxicos. Essa alteração evidencia o potencial imunomodulador do extrato e a capacidade de induzir a atividade citotóxica das células NK e linfócitos TCD8+, indicando a necessidade de estudos adicionais que avaliem os processos imunomoduladores envolvidos.

Palavras-chave

• Compostos fitoquímicos
• Fitoterapia
• Imunomodulação
• Linfócitos citotóxicos
• Proteínas citotóxicas