Avaliação da atividade do sobrenadante livre de células de Bacillus spp. contra Candida albicans e Candida auris

Introdução

As leveduras patogênicas Candida albicans e Candida auris são responsáveis por doenças infecciosas, principalmente em indivíduos imunocomprometidos. Ambas as espécies apresentam a capacidade de formar biofilmes, o que pode dificultar o tratamento das infecções fúngicas e aumentar sua resistência. Devido à resistência e rápida disseminação, essas leveduras representam uma preocupação em escala mundial, evidenciando a necessidade da descoberta de novos compostos antifúngicos. Nesse contexto, espécies do gênero Bacillus, como Bacillus subtilis, podem produzir compostos com atividade antimicrobiana potencialmente aplicáveis contra Candida spp.

Objetivo

O objetivo deste trabalho foi investigar a atividade do sobrenadante livre de células (CFS) de B. subtilis contra C. albicans e C. auris, bem como verificar a toxicidade do composto em análise in vivo nas larvas de Galleria mellonella.

Método

As cepas de B. subtilis foram cultivadas em meio LB, enquanto as leveduras patogênicas foram cultivadas em meio RPMI e YPD, por 24 h. O CFS de B. subtilis foi obtido por centrifugação, ajuste de pH, filtração e armazenamento. A atividade antifúngica foi avaliada por microdiluição em caldo, conforme o protocolo M27-A2 do CLSI. A produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) foi analisada por fluorescência através da marcação por DCFH-DA. A toxicidade e potencial antifúngico in vivo foram investigados em larvas de Galleria mellonella, monitoradas por sete dias. Os dados foram analisados estatisticamente, considerando p<0,05.

Resultados e discussão

Os ensaios de microdiluição em caldo demonstraram que o CFS 118 de B. subtilis apresentou atividade contra C. albicans, com redução de 41,45% no crescimento na diluição de 1:8. Em C. auris, o CFS promoveu redução de 47,11% e 26,45% nas diluições 1:2 e 1:4, respectivamente, evidenciando maior efeito nas concentrações iniciais. Esses resultados reforçam o potencial do gênero Bacillus como fonte de compostos antifúngicos e estratégia de biocontrole. A análise do mecanismo de ação revelou aumento imediato na produção de ROS em ambas as espécies de Candida na diluição de 1:2 e nas diluições subsequentes. A elevação de ROS pode provocar danos moleculares, que incluem a degradação de ácidos nucleicos, carbonilação de proteínas e peroxidação de lipídios, comprometendo a integridade celular. No modelo in vivo de G. mellonella, o CFS puro não apresentou toxicidade, pois não causou mortalidade nas larvas. Entretanto, nos ensaios de infecções por C. albicans e C. auris, a interação com o CFS não promoveu proteção direta contra as infecções fúngicas, resultando em baixa sobrevivência das larvas.

Conclusão

Conclui-se que o CFS de B. subtilis 118 apresenta potencial atividade antifúngica e baixa toxicidade em modelos in vivo de G. Mellonella. Contudo, não foi observado um efeito protetivo significativo contra os patógenos testados. Estudos futuros devem avaliar diferentes tempos de pré-tratamento e concentrações, a fim de otimizar sua eficácia. Adicionalmente, a indução de estresse oxidativo nas leveduras patogênicas indica resultados promissores.

Palavras-chave

• Leveduras
• Resistência
• CFS
• Probiótico
• ROS