Análise do processo de imunoterapia com células dendríticas e avaliação de neutrófilos e linfócitos nas fases pré e pós vacina

Introdução

A imunoterapia com células dendríticas (DCs), visa através de estímulos corretos mediar e aumentar a capacidade de imunovigilância no organismo. Os neutrófilos podem desenvolver mecanismos que atacam o tumor ou até mesmo outros mecanismos que podem favorecer a angiogênese e até imunossupressão. (HEDRICK; MALANCHI, 2022). Os linfócitos possuem o papel importante na atuação contra o câncer pois atuam juntamente com as DCs se diferenciando de maneira específica, para atuar no combate do câncer (PALUCKA; BANCHEREAU, 2012).

Objetivo

Buscou-se com essa pesquisa avaliar os níveis de neutrófilo e linfócito T total nas fases pré e pós vacina a fim de observar a possível melhora no quadro dos pacientes.

Método

Foram utilizadas amostras de pacientes tratados com imunoterapia de DCs no Instituto de Pesquisa em Oncologia (IPON). As análises foram realizadas a partir de dados previamente processados no citômetro de fluxo. O aparelho utilizado foi o FACSCalibur™ BD (BD Biosciences, San Diego, CA, EUA) e o protocolo realizado foi o sugerido no kit Fixation/Permeabilization BD Cytofix/Cytoperm™, utilizando anticorpos monoclonais da BD Pharmingen™. Os dados foram analisados através do software FlowJo 10.10.0, que possibilitou a construção de gráficos do tipo dot plots, baseando nos parâmetros de FSC (Forward Scatter), que avalia o tamanho das células, e SSC (Side Scatter), que avalia sua granularidade, ou seja, sua complexidade). Devido à quantidade de dados faltantes, o total de 18 pacientes teve que ser reduzido para 12 e, desta vez, foram avaliados em quatro momentos distintos: pré-terapia, pós-terapia 1, pós-terapia 2 e pós-terapia 3. Foi considerada a contagem total de neutrófilos, linfócitos e a razão entre eles, observando sua modificação conforme a aplicação da imunoterapia que foi feita quinzenalmente. A análise estatística foi realizada através do software GraphPad Prism 8, em que foi utilizado o teste de Shapiro-Wilk para analisar a normalidade dos dados e assim definir seu caráter. Assim, para o grupo de neutrófilos foi considerada a média com desvio padrão e no grupo de linfócitos, assim como a razão entre os dois, foi utilizada mediana com intervalo interquartil. Os gráficos foram apresentados em box plot devido à natureza dos dados.

Resultados e discussão

Os valores obtidos na razão de neutrófilos sobre linfócitos considerando a contagem total de células indicou que houve aumento do valor conforme as imunoterapias foram administradas. Apesar do aumento de neutrófilos em determinadas fases da imunoterapia, que pode indicar aumento do perfil inflamatório, os linfócitos podem ter sido reduzidos também pelo caso clínico de cada paciente. Observar a razão entre essas células nos auxiliam a compreender a variação como um todo, indicando que houve promoção do perfil inflamatório.

Conclusão

Conclui-se assim que a utilização da citometria de fluxo para visualizar essa variação celular dentro das aplicações da vacina com o passar do tempo é eficaz. As possíveis causas para essas variações precisam ser melhor avaliadas para compreender os principais efeitos da atuação das células de defesa mencionadas no organismo dos pacientes tratados e assim otimizar a atuação do sistema imune em relação aos tipos de câncer.

Palavras-chave

• citometria de fluxo
• células dendríticas
• imunidade mediada