Efeitos anti-inflamatórios da resolvina D1 (RvD1) em células mononucleares de pacientes com asma estimuladas com lipopolissacarídeo ou IL-13

Introdução

A asma é uma doença inflamatória crônica das vias aéreas marcada por acúmulo eosinofílico, hipersecreção de muco e hiperreatividade brônquica. Casos graves apresentam exacerbações frequentes e falhas na fagocitose macrofágica. A inflamação é impulsionada por citocinas, como a IL-13, agravada por agentes como lipopolissacarídeo (LPS). A resolução desse processo depende de mediadores lipídicos derivados do ômega-3, como as resolvinas, cujos níveis costumam estar reduzidos em asmáticos. Nesse contexto, a Resolvina D1 (RvD1) e seu epímero AT-RvD1 destacam-se por sua ação anti-inflamatória e de pró-resolução, reduzindo o recrutamento celular, além de aprimorar a fagocitose sem causar citotoxicidade.

Objetivo

O estudo investigou os efeitos anti-inflamatórios in vitro da AT-RvD1 em células mononucleares de indivíduos controles e asmáticos estimuladas com o lipopolissacarídeo (LPS) ou a IL-13. Avaliou-se a citotoxicidade e quantificou-se a produção das citocinas IL-10, TNF-alfa e IL-8 nas culturas.

Método

O estudo foi aprovado pelo CEP/UFTM (nº 3.719.096) e conduzido no Laboratório de Imunofarmacologia Experimental (LIFE) e no Ambulatório Maria da Glória/HC-UFTM. A amostra incluiu 40 participantes: 20 controles saudáveis e 20 pacientes com asma grave (diagnóstico GINA via questionário e espirometria). Amostras de sangue periférico foram coletadas para o isolamento de PBMCs e cultivadas em meio RPMI 1640. As células foram pré-tratadas com resolvina D1 (1, 10 e 100 nM) previamente e estimuladas com LPS (1 μg/mL) ou interleucina-13 (IL-13) (50 ng/mL) por 24 horas. Avaliou-se a citotoxicidade por MTT e quantificaram-se as citocinas TNF-alfa, IL-8 e IL-10 no sobrenadante por ELISA. As análises estatísticas foram realizadas no programa GraphPad Prism, considerando significância para p < 0,05.

Resultados e discussão

A resolvina D1 (RvD1) não apresentou citotoxicidade em nenhuma das concentrações testadas (1 nM, 10 nM e 100 nM), seja de forma isolada ou em associação aos estímulos com o LPS ou a IL-13 nos pacientes controles e nos pacientes asmáticos. A estimulação isolada com LPS e com IL-13 promoveu um aumento expressivo na produção das citocinas pró- inflamatórias, IL-8 e TNF-alfa, em ambos os grupos (Figuras 1 e 2). No entanto, o tratamento prévio com a RvD1 foi capaz de reduzir a secreção dessas citocinas de maneira dose-dependente, tanto na presença do estímulo LPS quanto IL-13 nos pacientes controles e, de forma análoga, nos pacientes asmáticos, obtendo maior destaque na concentração de 100 nM. Quanto à citocina anti-inflamatória IL-10, o estímulo com LPS induziu sua liberação, bem como a IL-13. Entretanto, a adição da RvD1 modulou seus níveis em ambos os grupos, sendo mais expressivo nos pacientes asmáticos (Figura 3).

Conclusão

A Resolvina D1 (RvD1) foi segura e não citotóxica em PBMCs de controles e asmáticos. O pré-tratamento atenuou a resposta inflamatória induzida por LPS ou IL-13, reduzindo as citocinas pró-inflamatórias IL-8 e TNF-alfa em ambos os grupos. Nos asmáticos, a RvD1 também regulou a citocina anti-inflamatória IL-10, evidenciando seu potencial promissor na modulação terapêutica da asma.

Palavras-chave

• Resolvina
• Asma
• LPS