Expressão do TGF-β1 e sua correlação com lesões morfológicas em um modelo de glomerulopatia crônica

Introdução

A Doença Renal Crônica (DRC) constitui um grave problema de saúde pública, sendo a fibrose renal, caracterizada pelo acúmulo de proteínas na matriz extracelular (MEC) como via comum final. O néfron é a unidade funcional renal, cujo glomérulo apresenta barreira de filtração glomerular (BFG), formada por endotélio fenestrado, membrana basal glomerular e podócitos. Alterações nessa arquitetura comprometem a função de filtração e o desenvolvimento de processos patológicos, como glomerulopatias. Entre os mediadores envolvidos, destaca-se o TGF-β1, citocina multifuncional que participa da regulação de processos celulares e o desenvolvimento da fibrose renal. Nesse contexto, o modelo de glomerulopatia induzida por Aminonucleosídeo de Puromicina (PAN) destaca-se como uma ferramenta relevante, permitindo a investigação dos efeitos da ativação da via do TGF-β e da progressão da lesão renal.

Objetivo

Investigar a influência da expressão do TGF-β1 no desenvolvimento das lesões glomerular em um modelo experimental de glomerulopatia induzida por PAN.

Método

Estudo experimental com ratos Wistar machos (~400g), distribuídos em grupos Controle, PAN 16 mg, PAN 8 mg e PAN + Tratamento. A indução da lesão renal foi realizada pela administração do Aminonucleosídeo de Puromicina, na dose estabelecida de 1mg/100g peso corporal, por quatro ou dois dias. O grupo tratado recebeu Galunisertib (10mg/kg), por via intraperitoneal, durante sete dias após a indução. Após o fim do experimento, os animais foram submetidos à eutanásia e os rins coletados. A fibrose renal foi avaliada a partir da coloração de Picro-Sírius (PS) sob microscopia de luz polarizada. Para análise ultraestrutural dos pedicelos, utilizou-se microscopia eletrônica de transmissão, mediante mensuração da largura média dos processos podais (Foot Process Width – FPW). A expressão renal de TGF-β1 foi avaliada por meio de imunoensaio ELISA. Por fim, os dados foram submetidos a análise estatística, considerando-se diferenças significativa quando p<0,05.

Resultados e discussão

A análise por Picro-Sírius não evidenciou fibrose detectável, sugerindo que a dose e o tempo utilizado não foram suficientes para desencadear alterações. Entretanto, na avaliação ultraestrutural, após indução de PAN observou alterações significativas no FPW em comparação ao Controle, resultando em comprometimento das estruturas dos podócitos com perda da integridade da barreira de filtração glomerular. Em relação aos níveis TGF-β1 renal, foi observado uma tendência de aumento no grupo PAN + tratamento aos 18 dias. Houve uma correlação positiva e significativa entre os níveis de TGF-β1, tanto sua produção sistêmica quanto in situ aos 18 dias, demostrando que apresentaram comportamento associado, entretanto, aos 60 dias não foi observada, sugerindo uma possível influência da temporalidade da lesão. No entanto, a ausência de correlação significativa entre TGF-β1 e FPW pode estar relacionada com a natureza distinta dessas variáveis.

Conclusão

A indução com PAN promoveu alterações ultraestruturais significativas, a partir do comprometimento da barreira de filtração glomerular, caracterizada por apagamento dos pedicelos e aumento do FPW. A correlação positiva e significativa dos níveis entre TGF-β1 sistêmico e in situ nas fases iniciais, demostram uma relação com a temporalidade da lesão, caracterizando uma lesão podocitária precoce. Entretanto, a tendência de aumento dessa citocina no grupo Tratado pode estar relacionada à ativação de vias não canônicas.

Palavras-chave

• Podócitos
• TGF-β
• PAN
• Glomerulpatia
• Rim